Шаг первый: В микропланшет, предварительно покрытый захватывающим антителом, добавляют образцы или стандарты. Любой присутствующий аналит связывается с иммобилизованным антителом.
Шаг второй: добавляется второе антитело, меченное HRP (детектирующее антитело), которое связывается с захваченным аналитом.
Шаг третий: в лунки добавляется раствор субстрата, и окрашивание в синий цвет пропорционально количеству анализируемого вещества, присутствующего в образце. Развитие окраски останавливается, цвет в лунках становится желтым. Измеряют поглощение цвета при 450 нм.