Реактив X-Gal

Описание

CAS — 7240-90-6 Фасовка — 100 мг X-Gal является хромогенным субстратом β-га-лактозидазы. X-Gal используется в сочетании с изопропил-bD-1-тиогалактозидом (IPTG) (I1401) для определения активности ß-галактозидазы в бактериальных колониях в колориметрическом анализе, чтобы отличить рекомбинанты (белые) от нерекомбинантов. (синий). X-gal расщепляется по связи β1-4 между галактозой и 5-бром-4-хлор-3-индолильной частью X-Gal β-галактозидазой путем гидролиза. Ферментативное расщепление X-Gal приводит к образованию нерастворимого в воде голубого осадка дихлордиброминдиго. В стратегиях клонирования с такими векторами, как Lamb-da-11, M-13m-p18 и 19, pUC18 и 19, pUR222, ген lacZ E. coli трансформируется в lac-клетки. После трансформации клетки проявляют ß-галактозидазную активность в присутствии среды, содержащей IPTG и X-Gal. Вставка фрагмента ДНК в сайты клонирования гена lacZ приводит к нарушению активности ß-галактозидазы, что приводит к появлению белых колоний на средах, содержащих X-Gal и IPTG. Нерекомбинантные клетки продуцируют на этих средах краситель синий индиго.